業績

(2000-現在)

1. Baba T. T.　Restoration of mineral depositions by dexamethasone in the matrix of nonmineralizing osteoblastic cells subcloned from MC3T3-E1 cells. 　Calcified Tissue International 67, 416-421 (2000)　

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　

2. Nemoto T. K., Ono T., Kobayakawa T., Tanaka E., Baba T. T., Tanaka K., Takagi T., Gotoh T. 　Domain-domain interactions of HtpG, an Escherichia coli homologue of eukaryotic HSP90 molecular chaperone. 　European Journal of Biochemistry 268 (20), 5258-5269 (2001)

Hsp90ホモログである大腸菌HtpGを発現してそのドメイン構造を解析した．HtpGは3つのドメイン構造を持ち，ダイマー形成においてN末ドメインとミドルドメインが相互作用し，さらにミドルドメインとC末ドメインが相互作用することを明らかにした．

3. Tanaka E., Nemoto T. K., Ono T.　Liberation of the intramolecular interaction as the mechanism of heat-induced activation of HSP90 molecular chaperone. 　European Journal of Biochemistry 268 (20), 5270-5277 (2001)

Hsp90のクライアント結合能はストレス条件で獲得されることが知られている．本研究ではこの活性化機構について検討した．Hsp90のN末ドメインのC末側に位置するクライアント結合部位は通常はミドルドメインによって覆われているが，熱ショック時にはミドルドメインから解離しクライアント結合部位が露出するというモデルを提案した．

4. Nemoto T. K., Ono T., Tanaka K. 　 Substrate-binding characteristics of proteins in the HSP90-family. 　Biochemical Journal 354, 663-670 (2001)

5. Ohba S., Baba T. T., Nemoto T. K., Inokuchi T. 　Expression of Hsp47in fibroblasts derived from fetal and neonatal rat tongues.　 Japanese Journal of Oral Biology 44 (6) 151-158 (2002)

6. Matsumoto S., Tanaka E., Nemoto T. K., Ono T., Takagi T., Imai J., Kimura Y., Yahara I., Kobayakawa T., Ayuse T., Oi K., Mizuno A.　Interaction between the N-terminal and middle regions is essential for the in vivo function of HSP90 molecular chaperone.　Journal of Biological Chemistry 277, 34959-34966 (2002)

Hsp90のN末ドメイン(1-400)とミドルドメイン(401−618)の重要性について検討した．アミノ酸置換E517A/L592Aを持つミドルドメインは低温度条件ではN末ドメインと結合したが，高温条件（37℃）では結合能を失った．これに呼応して，この変異を導入したHsp90 (yHsc82)のみを発現する酵母は，低温条件では生育可能だったが，高温では生育できなかった．

7. Wang, Z.-L., Inokuchi, T., Ikeda, H., Baba T. T., Uehara M., Kamasaki, N., Sano K., Nemoto T. K., Taguchi T.　Collagen-binding molecular chaperoneHSP47 expression during healing of fetal skin wounds.　 International Journal of Oral and Maxillofacial Surgery 31, 179-184 (2002)

8. Wang, Z.-L., Inokuchi T., Nemoto T. K., and Uehara M., Baba T. T.　Antisense oligonucleotide against collagen-specific molecular chaperone HSP47suppresses scar formation in rat wound. 　Plastic and Reconstructive Surgery 111 (6), 1980-1987 (2003)

9. Yamada S., Ono T., Mizuno A., Nemoto T. K.　 Hydrophobic segment within the C-terminal domain is essential for both client-binding and dimer formation of HSP90 molecular chaperone.　 European Journal of Biochemistry 270 (1), 146-154 (2003)

Hsp90はN末側に加えてC末側にもクライアント結合部位があり，さらにC末側ドメインはダイマー形成能も有する．本研究ではこれらの異なる機能の関連について検討した．その結果，ヒトHsp90αでは２つの機能ドメインは，ほぼ一致したアミノ酸配列に局在した．疎水性領域662-678において，疎水性アミノ酸を親水性アミノ酸へ置換すると，２つの機能はともに消失した．従って，C末側のクライアント結合はHsp90のダイマー形成を検出している可能性がある．

10. Ohba S., Wang Z.-L., Baba T.T.. Nemoto T. K., Inokuchi T. 　Antisense oligonucleotide against 47-kDa heat shock protein (hsp47) inhibits wound-induced enhancement of collagen production.　Archives of Oral Biology 44 (6), 541-548 (2003)

ラット舌に作った傷から得た線維芽細胞のコラーゲン合成は亢進していたが，この亢進はHsp47アンチセンスオリゴによって抑制できる．旧 口腔外科学第二講座との共同研究．

11. Ishiwatari-Hayasaka H., Maruya M., Sreedhar A. S., Nemoto T. K., Csermely P., Yahara I.　 Interaction of neuropeptide Y and Hsp90 through a novel peptide binding region.　 Biochemistry 44 (42), 12972-12980 (2003)

矢原研（都立臨床研）との共同研究

12. Nemoto T. K., Fukuma Y., Yamada S., Kobayakawa T., Ono T., Ohara-Nemoto Y.　 The region, adjacent to the highly immunogenic site and shielded by the middle domain, is responsible for self-oligomerization/client binding of HSP90 molecular chaperone.　 Biochemistry 43 (23), 7628-7636 (2004)

ヒトHsp90αの高抗原性領域 (291-299)近くで，ミドルドメインによってシールドされる領域がHsp90の自己重合とクライアント結合に必須である．この領域でクリティカルな部位はアミノ酸340-350である．

13. Kawano T., Kobayakawa T., Fukuma Y., Yukitake H., Kikuchi Y., Shoji M., Nakayama K., Mizuno A., Nemoto T. K. 　A omprehensive study on their immunological reactivity of Hsp90 molecular chaperone.　Journal of Biochemistry 136, 711-722 (2004)

ヒト（4種類のアイソフォーム），酵母，大腸菌，歯周病菌P.gingivalisのHsp90の抗原性を比較した．原核生物のHsp90 (HtpG)と哺乳類のHsp90は交差性を示さなかった．意外にもP. gingivalis htpG遺伝子の破壊はその成長やストレス応答性に何の影響も与えなかった．

14. Ono T., Nemoto T. K.　 Two forms of apatite deposited during mineralization of the hen tendon.　Matrix Biology 24, 239-244 (2005)

加齢ニワトリ足の腱に生じる異所性石灰化機構について検討した．主な石灰化物はコラーゲン線維に沿って形成され針状の結晶構造を示した．しかし，腱細胞が存在していたスペースには，それとは異なり，麟片上の形態をもつ二種類のミネラルが検出された．その構造は人工的に作成したヒドロキシアパタイトに酷似していた．

15. Kishimoto J., Fukuma Y., Mizuno A., Nemoto T. K.　 Identification of the penta-peptide　constituting a dominant epitope common to all eukaryotic Hsp90 molecular chaperone.Cell Stress and Chaperones 10 (4), 296-311 (2005)

33種類の抗Hsp90モノクローナル抗体のうち，19モノクローナル抗体のエピトープを大腸菌ディスプレー法で決定した．その結果，Hsp90の高抗原性領域の一つ（サイトIcと命名されている）は事実上すべての真核生物で共通の抗原性を有することが判明した．つまりこの部位を認識するモノクローナル抗体のうち２つ（K41110とK41116C）は検討した全ての真核生物由来Hsp90を認識した．

16. Nemoto T. K., Fukuma Y., Itoh H., Takagi T., Ono T. 　A disulfide bridge mediated at cysteine 574 is formed in the dimer ofthe 70-kDa heat shock protein. 　Journal of Biochemistry 139 (4), 677-687 (2006)

Hsp70は通常モノマーで機能するが，一部はダイマーになる．本研究ではHsp70のダイマーサブユニット構造について検索した．その結果，Hsp70のC末側のクライアント結合ドメインがダイマーになることを確認した．さらにC末の20アミノ酸残基を欠失するとダイマーになりやすくなること，またその際にCys574を介したジスルフィド結合が形成されることを明らかにした．

17. 小野俊雄，根本孝幸　 ニワトリ腱の異所性石灰化機構の解析．歯科基礎医学会誌 43, 34-42 (2001)

18. 小野俊雄，根本孝幸　 ニワトリの石灰化腱の細胞痕跡にみられるミネラル形態． 医学と生物学 146 (3) 33-40 (2003)

19. 小野俊雄，根本孝幸　 プラズマレプリカ法による加齢ニワトリ腱コラーゲンの三次元石灰化構造観察．医学と生物学 147 (5), 81-85 (2003)